Hidrólisis de Proteínas

La hidrólisis de proteínas es la ruptura de la estructura primaria, es decir la ruptura de la secuencia de una proteína. La hidrólisis de las proteínas termina por fragmentar las proteínas en aminoácidos.

PRÁCTICO

OBJETIVOS:

a) Comprobar que la desnaturalización de las proteínas puede llevarse a cabo por el uso de solventes, bases y ácidos fuertes, así como por el uso de detergentes y por calor.

b) Demostrar que una proteína puede ser hidrolizada en medio ácido y en condiciones controladas de temperatura.

MATERIALES Y SUSTANCIAS:

    Vaso de bohemia

    Varilla de vidrio

    Mechero

    Soporte

    Tela metálica

    Gradilla

    Tubos de ensayo

    Termómetro

    Papel de filtro

    Leche descremada

    Ácido etanoico 2,0 M

    Hidróxido de sodio al 10%

    Sulfato cúprico al 1%

    Ácido nítrico concentrado

PRUEBA DE BIURET

La reacción o prueba de BIURET es un método que detecta la presencia de compuestos con dos o más enlaces peptídicos y, por tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos.

El reactivo del Biuret (sulfato de cobre en una base fuerte) reacciona con los enlaces del péptido y cambia el color cuando entra en contacto con otra sustancia, tornándose VIOLETA. Mientras más cantidad de proteína esté presente en la solución, más oscuro es el color.

PRUEBA DE XANTOPROTEICO

Es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, especialmente en presencia de tirosina.

PROCEDIMIENTO

Parte 1: EXTRACCIÓN

1.     Colocamos aproximadamente 25 ml de leche descremada en un vaso de Bohemia.

2.     Calentamos aproximadamente 40 °C agitando con varilla de vidrio.

3.     Adicionamos ácido etanoico 2,0 M (gota a gota) agitando en forma continua hasta coagulación total.

4.     Separamos el coagulo de caseína del suero mediante filtración.

5.     Sacamos cuidadosamente la caseína con la ayuda del papel de filtro.

6.     Separamos dos porciones del solido que obtuvimos de aproximadamente 1 cm³ y lo colocamos en 2 tubos de ensayo

Parte 2: CARACTERIZACIÓN

Reacción de Biuret: agregamos sobre la caseína de uno de los tubos 20 gotas de NaOH al 10%. Luego agregamos 2 gotas de solución de CuSO₄ al 1%. Anotamos las observaciones

Reacción Xantoproteica: Agregamos sobre la caseína del segundo tubo 10 gotas de HNO₃ concentrado. Esperamos un par de minutos y anotamos las observaciones 

Lo que obtuvimos:

Más pruebas con Biuret y Xantoproteica:

Proteínas 2

DIÁLISIS: En bioquímica, la diálisis es el proceso de separar las moléculas en una solución por la diferencia en sus índices de difusión a través de una membrana semipermeable.

El objetivo de esta práctica es, dentro de una solución, observar que a través de la membrana semipermeable solamente pasaron las sales (NaCl), mientras que la proteína (gelatina) quedó en la solución, es decir el reconocimiento del anión cloruro (Clˉ).

Los materiales utilizados fueron los siguientes:

Dializador

Agua

Proteína (gelatina)

NaCl

AgNO₃

Membrana semipermeable de celofán

Agua destilada

Vaso de Bohemia

PROCEDIMIENTO:

Colocamos solución de agua, proteína y NaCl en el dializador e hicimos las pruebas con el reactivo nitrato de plata (AgNO₃), los resultados fueron los siguientes:

El siguiente paso fue colocar en un vaso de Bohemia una cierta cantidad de agua destilada y dentro de este introducirle el dializador con la solución y esperar unos instantes para observar cambios. Tomamos pruebas dentro y fuera del dializador, utilizando como reactivos el Biuret y AgNO₃. Lo que obtuvimos fue lo siguiente:

NaCl → Naᶧ + Clˉ    AgNO₃ → Agᶧ + NOˉ₃           

                                                      

                             

                                  

= Agᶧ + Clˉ → AgCl - Cloruro de plata